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想了解制作標準菌種的方法嗎?還不快看過來!

更新時間:2022-04-07瀏覽:1062次
  
  標準菌種從菌種保藏中心購買的原始菌種管是玻璃安瓿裝的凍干菌,接收同時應檢查是否有隨菌種附有的相關資料。接收菌種時應檢查安瓿的數量和名稱,和每一支安瓿的完整性。在相應的菌種接收記錄上記上所有的關于菌種的信息,如名稱、數量和接收日期等。在菌種安瓿及菌種管上粘貼標簽,內容包括:菌種名稱、菌種代號、代次、接收日期、接收人、貯存條件、有效期至。新購入的0代原始菌種儲存于-20℃,有效期為三年。從上級藥檢部門購買的已接種好的菌種斜面(3代)應檢查菌種管是否完好。儲存于2~8℃,有效期為3個月。
  標準菌種的制作方法:
  1.打開潔凈工作臺。
  2.在安瓿的外表面用75%的酒精擦拭并讓其自然風干。
  3.用一小砂輪在安瓿的上部劃一條線,用手輕輕將安瓿掰開(開啟安瓿時必須小心,因為安瓿遇熱時可能會破裂)。
  4.以無菌方法用一無菌吸管從已準備好的上述液體培養基中移取0.5~0.8ml到安瓿中。
  5.輕輕地旋轉安瓿以使凍干菌種和液體培養基充分混合并*溶解。
  6.用無菌吸管將安瓿內菌液全部轉接到相應的液體培養基。
  7.根據安瓿上所標明的不同菌種類型而將其培養于相應的溫度(細菌培養溫度30~35℃,培養18~24小時;真菌培養溫度23~28℃,培養3~5天。觀察是否渾濁,渾濁說明菌種復蘇生長;若不渾濁,細菌應延長培養時間至7天,真菌應延長培養時間至14天,若仍未渾濁,滅菌處理。
  8.黑曲霉的菌懸液先室溫待菌懸液融化后用無菌吸管吸取管內液體1~2滴滴在改良馬丁瓊脂斜面上,用吸管涂布均勻,置23~28℃培養5~7天,斜面正面為黑褐色厚絨狀,色澤均一,不應有雜色,斜面側面無色,接近菌層培養基略帶黃色。確認后用含有0.05%(ml/ml)的吐溫-80的0.9%無菌氯化鈉溶液洗脫到無菌試管中。
  9.標準菌種取經復蘇后的上述細菌菌液8-10ml至液體培養基中按g項操作對菌種進行復壯。以無菌技術向復壯后的菌種中加入100ml20%的無菌甘油混勻,1-2ml/管分裝于凍存管。每個菌種制備10支,按順序進行編號,一支做為質控管進行質量控制,即進行相應的確認。其余作為儲備管。黑曲霉的h項下洗脫液按h項下方法進行復壯,制成復壯后的孢子懸液20ml。以無菌技術向復壯后的菌種中加入20ml、30%的無菌甘油混勻,1-2ml/管封存于凍存管。制備10支,按順序進行編號,一支做為質控管進行質量控制,即進行相應的確認。其余作為儲備管。將上述制備好的凍存管逐支粘貼標簽。內容包括:菌種名稱、菌種代號、編號、代次、制備日期、制備人、貯存條件、有效期至等。
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